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    組織切片的免疫組化方法

    來源:admin  瀏覽量:  更新時間:2016-10-26 21:17:19

    1、脫蠟和水化

    依次將載玻片放入二甲苯(2次)、100%酒精(2次)、95%酒精、80%酒精、75%酒精;每次10min;

    PBS沖洗三次,每次3分鐘(3×3’)。 

    2、抗原修復

    取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液,加入微波盒中,微波加熱至沸騰,將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上,放入已沸騰的緩沖液中,中檔微波處理10分鐘,取出微波盒自然泠卻至室溫,然后從緩沖液中取出玻片,先用蒸餾水沖洗兩次,之后用PBS沖洗2×3’。(注:不是所有的抗體都需要微波修復的,視具體情況而定。 

    3、阻斷

    每張切片加13%H2O2,室溫下孵育10分鐘,以阻斷內源性過氧化物酶的活性。PBS沖洗3×3’。 

    4、封閉

    切片滴加山羊血清,置于濕盒中,室溫或37℃孵育1hr;吸去血清,加PBS清洗3次,每次3min; 

    5、標記一抗

    將抗體按1:100稀釋,滴加到切片上;于濕盒中4℃放置過夜;PBS3次,每次3-5min; 

    6、標記二抗

    用抗體稀釋液將二抗按1:100稀釋,滴加到切面上,室溫放置1Hr; PBS3次,每次3-5min; 

    7、顯色

    DAB顯色試劑盒操作,顯微鏡下跟蹤顯色效果; 

    8、復染

    蘇木精復染,酒精鹽酸分色; 

    9、封片

    逐級脫水,二甲苯中透明,中性樹膠封片。

    電話:027-87003398

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