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    一個表達Nephrin和Podocin的條件永生化的人足細胞系

    來源:admin  瀏覽量:  更新時間:2021-03-03 08:44:06

       細胞永生化有利于建立在體基因突變的遺傳病細胞模型。2002Moin A Saleem等人發表在《美國腎臟病學會》上的一篇文章“A Conditionally Immortalized Human Podocyte Cell Line Demonstrating Nephrin and Podocin Expression”,通過向足細胞轉染SV40-T基因,成功開發了有條件永生的人類足細胞細胞系。足細胞在體外允許溫度(33℃)下增殖,而在轉移至非允許溫度(37℃)后,進入了生長停滯狀態并表達不同的足細胞分化標志物。

     

    培養足細胞形態及足細胞特異性標志物的表達

     

       人足細胞是位于腎小球基底膜外部的細胞,參與構成腎小球的三層濾過結構,其功能異常是引起蛋白尿疾病的重要因素。人們對于該細胞維持濾過屏障功能的特性以及功能基礎尚不清楚,為了在分子水平弄清楚這一復雜細胞的功能機制,實現該細胞的體外培養顯得越來越重要。

           長期以來,將從組織中分離的足細胞在標準條件下進行培養,足細胞會失去突起結構,表現為脫分化,喪失了足細胞作為濾過屏障的功能,使體外培養中足細胞的選擇性分析十分困難。(圖中掃描電子顯微鏡結果顯示左圖為33℃時未分化足細胞的形態,右圖為37℃時分化樣的足細胞)

     

     

       該研究從一位三歲孩子的腎切除標本中分離出人足細胞,隨后進行細胞培養并用tsSV40表達載體轉染細胞,構建足細胞細胞系。37℃誘導分化細胞,結果與體內足細胞相同,細胞形成細小突起,表達成熟足細胞特異性標志物synaptopodin,以及裂孔隔膜復合物成分P-cadherin、nephrin、CD2AP、Podocin等。

     

    裂孔隔膜相關蛋白的免疫熒光、RT-PCR及Western Blot分析

     

       除此以外,免疫染色顯示細胞周期蛋白的表達也與體內足細胞相一致,證實了足細胞終末分化狀態。以上研究為足細胞的周期進程機制以及各種功能特性的研究提供了有用工具。

     

    細胞周期相關蛋白的免疫熒光顯微鏡

     


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