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    NMD (無義介導的mRNA 降解)技術解析

    來源:admin  瀏覽量:  更新時間:2020-08-11 10:23:13

    nonsense-mediated mRNA decay, NMD 無義介導的mRNA 降解)

     

    服務概述:

    mRNA 的降解是基因表達過程中一個很重要的調控方式,其中無義介導的mRNA 降解是近來發現的一種在真核生物中廣泛存在的高度保守的RNA 監控機制??梢宰柚巩惓5?/span>截斷蛋白的產生,保證細胞的正常生理功能,在人類的遺傳病和癌癥病原學中,扮演了一個很重要的角色。本項目通過以下3 個步驟來驗證該突變導致的mRNA 水平的降解是否源于NMD 的發生。

     

    步驟一:構建真核表達載體

    克隆帶有突變位點(產生提前終止翻譯密碼子premature termination condon,PTC)的目標基因組片段,構建重組表達載體。

     

    步驟二:基因表達量檢測

    重組載體轉染細胞后分別從mRNA 水平(qPCR)和蛋白水平(WB) 檢測突變帶來的表達差異。

     

    1:缺失突變c.1550_1551del 造成提前終止密碼子(PTC)的產生,導致蛋白表達提前終止,突變體mRNA 和蛋白水平的表達量均顯著下調。

     

    步驟三:NMD 回復驗證如果檢測提示突變后發生了mRNA 水平的降解,即可進一步驗證NMD 降解(無義突變介導的mRNA 降解)的可能性。實驗通過抑制蛋白合成(CHX 放線菌酮)或抑制NMD途徑的關鍵蛋白組分(si-UPF1)這兩組回復實驗,檢測mRNA 和蛋白表達水平來確定突變導致的mRNA 表達水平降低是否由NMD 降解途徑產生的。

     

    2通過抑制蛋白合成(CHX)和抑制NMD 途徑關鍵組分(UPF1)這兩組回復實驗,結果均證明,突變導致的mRNA 表達水平降低是由NMD 降解途徑產生的。

     

     

    服務特點:

    1. 根據突變所在位置,結合生物信息學的方法,幫助客戶預測得到陽性結果(即突變會

    導致NMD 發生)的可能性,并設計整套優化實驗方案;

    2. 根據客戶需求等因素,選取兩種不同的真核表達載體及兩種不同組織來源的細胞系進

    NMD 驗證,提高獲得陽性結果的可能性。

     

    服務內容:

    客戶提供:

    客戶需提供突變檢測報告。

     

    交付結果:

    1. 構建的表達載體;

    2. 服務報告:內容包括生物信息學預測結果,載體構建報告,基因表達水平檢測結果,

    NMD 檢測結果。

     

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    電話:027-87003398           微信:15607196951

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