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    平板克隆形成實驗

    來源:admin  瀏覽量:  更新時間:2020-01-16 16:24:05

    細胞克隆形成率即細胞接種存活率,表示接種細胞后貼壁的細胞成活,并形成克隆的數量。貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆,而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活性的細胞??寺⌒纬陕史从臣毎后w依賴性和增殖能力兩個重要性狀。

     

    實驗步驟:

    1、取對數生長期的細胞,用胰蛋白酶消化并吹打成單個細胞,并把細胞懸浮培養基中備用。

    2、將細胞懸液稀釋,以每孔200個細胞的密度接種于6孔板中,并輕輕轉動,使細胞分散均勻。置37℃ 5% CO2及飽和濕度的細胞培養箱中培養。

    3、待細胞貼壁后,分別加入黃連素和無糖培養基處理24h,隨后更換正常培養基繼續培養。

    4、經常觀察,當培養皿中出現肉眼可見的克隆時,終止培養。棄去上清液,用PBS小心浸洗2次。加4%多聚甲醛固定細胞1ml固定15分鐘。然后去固定液,加適量GIMSA應用染色液染1030分鐘,然后用流水緩慢洗去染色液,空氣干燥。

    5、將平皿倒置并疊加一張帶網格的透明膠片,用肉眼直接計數克?。總€克隆含有細胞數在50個以上,大小在0.3-1.0mm之間),或在顯微鏡(低倍鏡)計數大于10個細胞的克隆數。最后計算克隆形成率。

     

    克隆形成率 =(克隆數/接種細胞數)×100%


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