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    co-IP免疫共沉淀實驗

    來源:admin  瀏覽量:  更新時間:2018-07-24 15:35:17

    、服務概述:
            免疫共沉淀(co-IP)以抗原和抗體之間的特異反應為基礎,是研究蛋白質互作的經典方法。其原理是:當細胞在非變性條件下被裂解時,完整細胞內存在的許多蛋白質-蛋白質間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質X的抗體免疫沉淀X,那么與X在體內結合的蛋白質Ys也能沉淀下來。該方法常用于驗證兩種目標蛋白質是否在體內結合;也可用于篩選某一靶蛋白的新的互作搭檔。  

     

    二、技術優勢及服務特點:
        1. 提供含有不同啟動子(CMV、T7等)、不同融合標簽(Flag、HA、Myc、GFP)真核表達載體表達目標蛋白;

        2. 設置嚴格的同種屬、等量IgG對照體系,保證結果的客觀性、可靠性;

        3. 可根據蛋白結構,快速建立系列截短體或突變體,確定蛋白互作的關鍵結構域或結合位點。

     

    三、服務內容及流程:

    l 證兩個蛋白之間的相互作用(表達豐度足夠可檢測內源蛋白互作)

    l 確定蛋白互作的關鍵位點或結構域

    l 篩選與目的蛋白互作的未知蛋白

    四、顧客提供

    1. 誘餌/目的蛋白對應的物種信息、基因編號、序列或cDNA模版。如需特殊組織、細胞、蛋白質溶液等樣品,離體或裂解后迅速超低溫處理、-80℃保存、干冰運輸。動物組織不少于400mg;植物組織不少于2g;細胞:2x107個細胞。

    2. 說明選用標簽的特殊要求,一般標簽抗體我方提供;特定抗體需用戶提供,且能滿足IPWB的要求。

     

    五、報告內容及周期:

    1. 相作蛋白鑒定結果,WB圖片及實驗報告;
       2. 質譜鑒定結果,完整的實驗步驟、儀器參數、軟件信息等。

        3. 實驗周期:3-6


    六、應用及結果示例:

     

    例一:雙向驗證XY兩個蛋白之間的相互作用


    例二:根據蛋白X的結構域特征,構建全長及系列截短體(No.1-5)的表達載體,co-IP實驗確定蛋白X與蛋白Y互作的關鍵結合區域。根據蛋白X的已知突變,構建野生型及突變體(No.6-9)的表達載體,co-IP實驗確定蛋白X突變后對蛋白Y互作的影響或結合強度。



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