co-IP免疫共沉淀實驗

一、服務概述：
        免疫共沉淀（co-IP）以抗原和抗體之間的特異反應為基礎，是研究蛋白質互作的經典方法。其原理是：當細胞在非變性條件下被裂解時，完整細胞內存在的許多蛋白質－蛋白質間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質X的抗體免疫沉淀X，那么與X在體內結合的蛋白質Ys也能沉淀下來。該方法常用于驗證兩種目標蛋白質是否在體內結合；也可用于篩選某一靶蛋白的新的互作搭檔。  

二、技術優勢及服務特點：
    1. 提供含有不同啟動子（CMV、T7等）、不同融合標簽（Flag、HA、Myc、GFP）真核表達載體表達目標蛋白；

    2. 設置嚴格的同種屬、等量IgG對照體系，保證結果的客觀性、可靠性；

    3. 可根據蛋白結構，快速建立系列截短體或突變體，確定蛋白互作的關鍵結構域或結合位點。

三、服務內容及流程：

l 驗證兩個蛋白之間的相互作用（表達豐度足夠可檢測內源蛋白互作）

l 確定蛋白互作的關鍵位點或結構域

l 篩選與目的蛋白互作的未知蛋白

四、顧客提供：

1. 誘餌/目的蛋白對應的物種信息、基因編號、序列或cDNA模版。如需特殊組織、細胞、蛋白質溶液等樣品，離體或裂解后迅速超低溫處理、-80℃保存、干冰運輸。動物組織不少于400mg；植物組織不少于2g；細胞：2x10⁷個細胞。

2. 說明選用標簽的特殊要求，一般標簽抗體我方提供；特定抗體需用戶提供，且能滿足IP和WB的要求。

五、報告內容及周期：

1. 相作蛋白鑒定結果，WB圖片及實驗報告；
   2. 質譜鑒定結果，完整的實驗步驟、儀器參數、軟件信息等。

    3. 實驗周期：3-6周

六、應用及結果示例：

例一：雙向驗證X和Y兩個蛋白之間的相互作用

例二：根據蛋白X的結構域特征，構建全長及系列截短體（No.1-5）的表達載體，co-IP實驗確定蛋白X與蛋白Y互作的關鍵結合區域。根據蛋白X的已知突變，構建野生型及突變體（No.6-9）的表達載體，co-IP實驗確定蛋白X突變后對蛋白Y互作的影響或結合強度。

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