shRNA慢病毒細胞株構建

siRNA和shRNA載體

在目前的研究中，實驗基因表達水平的敲低主要是通過轉染siRNA或者shRNA載體來實現的。

siRNA（Small interfering RNA）是一種21-25核苷酸的小分子RNA，由Dicer(RNAaseⅢ家族中對雙鏈RNA具有特異性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成員，激發與之互補的目標mRNA的沉默。由于有些類型細胞脂質體效果差，轉移到細胞內的siRNA半衰期短，體外合成siRNA對基因表達的抑制作用通常是短暫的，因而使其應用受到較大的限制。

shRNA載體可以將siRNA把位點克隆到載體上，然后轉移到細胞內轉錄形成siRNA，其對基因表達抑制的效果也不遜色于體外合成siRNA，在長期穩定表達載體的細胞中，甚至可以發揮長期阻斷基因表達的作用。

shRNA慢病毒包裝

百翼生物實驗室提供帶PURO篩選標記和GFP/PURO雙篩選標記的shRNA載體，將目標靶點克隆到shRNA載體，然后通過轉染獲得慢病毒毒液。

shRNA慢病毒感染及穩轉株篩選

使用慢病毒毒液感染目標細胞，然后通過篩選標記進行篩選，挑取單克隆恢復培養成細胞系（貼壁細胞），最終獲得穩轉細胞系。

服務價格

客戶提供：

1、目標基因的基因號及shRNA靶點序列；

2、如客戶不能提供明確的靶點序列，本實驗室可免費設計3條靶點進行驗證；靶點敲低效率驗證試驗需另行收費。

實驗結果：

1、包裝的毒液或穩轉細胞株；

2、操作手冊一份；

3、引物序列、載體圖譜、測序報告；

4、詳細的項目報告。